Introducción
Mecanismo de acción
Procesos relacionados
Proteinas implicadas
Comparación de secuencias
Metas futuras
Referencias

MECANISMO DE ACCION

La vía comienza con un corte progresivo (ATP dependiente) de un dsRNA largo en fragmentos de doble cadena de 21-25 nucleótidos denominados siRNAs. Estos duplex de siRNAs son incorporados en un complejo proteíco que no es competente aún para mediar RNAi. La separación ATP dependiente del duplex remodela el complejo para dar lugar a RISC* (complejo silenciador inducido por RNA donde el asterísco indica la conformación activa del mismo). Finalmente en un paso que requiere un poco o nada de ATP, el complejo puede reconocer y cortar el RNA diana que es complementario a la hebra guía del siRNA.
Los siRNas son producidos por un enzima llamado Dicer, que es un miembro de la familía RNAasa III de las endonucleasas específicas de dsRNA. Como los productos de otras RNAasas III, los duplex de siRNAs contienen extremos 5´fosfato y 3´hidroxilo, y dos nucleótidos simples en el extremo 3´.
La longitus de los siRNAs es específico de especie y puede reflejar diferencias en la estructura de los dominios RNAasa III de los distintos homólogos Dicer. Dentro de las RNAasas III, Dicer es único en cuanto el corte del dsRNA requiere ATP; este hallazgo ha sido atribuido a la presencia de una “helicasa” ATP dependiente en el extremo amino terminal.
Aunque todavía no se ha demostrado in vivo el mecanismo de destrucción del RNA diana, los estudios bioquímicos parecen indicar que cada RISC contiene un único siRNA y una ribonucleasa. Esta nucleasa no se ha identificado todavía, pero algunos datos sugieren que es diferente de Dicer. Finalmente, hay experimentos que indican que cada siRNA dirige el corte endonucleotídico del RNA diana aproximadamente hacia el centro de la hebra quía del siRNa, que es complementaria a la secuencia diana.

Animacin del proceso

Amplificación de la señal

“Screenings” para requerimientos genéticos en silenciamiento génico en plantas, hongos y gusanos han identificado una familia de proteínas cuya secuencia sugiere que son RNA polimerasas RNA dependientes (RdRPs). El descubrimiento de estas proteínas proporciona una posible explicación para la gran eficiencia de los dsRNAs en el silenciamiento génico. Se han propuesto dos modelos:

1.- “Random degradative PCR model”: propone que una RdRP usa la cadena siRNA guía como primer para sintetizar nuevo RNA, utilizando el RNA diana como molde y convirtiendolo en dsRNA que puede ser cortado por Dicer, liberando un nuevo conjunto de siRNAs que posibilitan nuevas rondas de sintesis, así como la destrucción de la diana.

2.- El segundo modelo propone que tras el corte del mRNa se produce un fragmento de RNA aberrante que es utilizado por una RdRP, sintetizando la cadena complementaria y dando lugar a un dsRNA que podrá ser cortado por Dicer, con la consecuente producción de nuevos siRNAs. Señalar que diversas RNA polimerasas, incluyendo RdRPs, pueden sintetizar RNA sin la necesidad de un primer.

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