Introducción directa

La introducción directa se divide en:

           Aleatoria
  Los sistemas retrovíricos (como el virus del VIH) llevan a cabo una inserción de su material en el genoma del huésped gracias a sus retrotranscriptasas, pero estos sistemas mediados por retrovirus, llevan a una inserción aleatoria, no se da en un punto específico del genoma del receptor, lo que puede conllevar una inserción deleteria para el hospedador, ya que este tipo de inserciones, aunque permanetes, pueden desactivar algun gen, así como volverlo deletereo o simplemente detenga los sistemas de control.

            Targeting
Lo vamos a tratar según si utilizamos:

                Sustitución dirigida de genes en cultivos celulares, que sigue los pasos siguientes:

1.Se alternan copias de un gen, en un tubo de ensayo, y se prepara un vector directorel gen mostrado (será la región homologa con el cromosoma) se ha inactivado (o se ha realizado cualquier otro procedimiento que se quiera seguir), alternando con regiones homólogas se introduce un gen que servirá como marcador para ver si el vector se ha introducido en el cromosoma, externo a las regiones homólogas de introduce un segundo marcador
2.El vector, junto a sus dos marcadores se introduce en células de embrión.
3.El vector se alinea en el cromosoma con el gen normal Recombinación homóloga, las regiones homólogas, junto con todo el DNA entre ellas, se insertan en la región que originalmente ocupaba el gen, excluyendo el marcador externo (el situado en la región no homóloga). Este proceso puede dar una inserción aleatoria (todo el vector, incluida la región no homóloga, se insertan al azar en cualquier punto del genotipo), no inserción (el vector no encuentra ninguna región homóloga y finalmente es degradado)  {en la mayoría de las células} o la inserción correcta
4.Por último resta la identificación de las células que han insertado correctamente el vector Células portadoras. Esto se consigue a través de los genes marcadores. Se cultivan las células en un medio que contiene ciertas drogas (dependiendo de los genes insertados), y con la viabilidad de las poblaciones celulares se distingue aquellas que presentan la sustitución dirigida (sólo son capaces de sobrevivir aquellas que sólo presentan el gen de la región homóloga)

            Sustitución génica dirigida en ratones, que sigue los pasos siguientes:

1.Se aíslan células madre embrionarias (ME) de la estirpe A, se le introduce una mutación dirigida en un cromosoma (Inserto), las células ME colocan en embriones jóvenes
2.Los embriones portadores de las células SE ME dejan crecer a término en madres de alquiler. Seleccionamos las Quimeras, son aquellos individuos que contienen células de las dos estirpes celulares [Si por ejemplo se tratase de un carácter fenotípico dominante, veríamos la cría en mosaico lo que nos anunciaría que se ha dado la inserción]
3.Cruzamos Quimeras macho, con hembras normales, analizamos la descendencia en busca de marcadores de la mutación dirigida. Si los animales han nacido del esperma procedente de células ME, con probabilidad de portar la mutación, el examen directo de los genes revela cuales han heredado la mutación Que son heterozigotos/portadores para ese carácter.
4.Cruzando portadores, obtendremos individuos con mutación en las dos copias del gen inserto. Se identifican los individuos por análisis del DNA, y por último se observa si tienen algún defecto físico o de comportamiento.

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